（一）組織培養(yǎng)技求的應(yīng)用

    1．無(wú)性系繁殖無(wú)性系繁殖是植物組織培養(yǎng)應(yīng)用的主流之一，用植物組織培養(yǎng)進(jìn)行無(wú)性繁殖的優(yōu)點(diǎn)是，用材少，速度快，不受氣候、季節(jié)、基質(zhì)等自然條件的影響，比傳統(tǒng)的常規(guī)繁殖方法要快得多，人們又叫它"快速繁殖"或"微型繁殖"。其常見(jiàn)繁殖方式有短枝扦插、芽增殖、原球莖、器官分化和胚狀體發(fā)生。其中芽增殖在盆栽花卉繁殖中應(yīng)用最為普遍，如草本植物四季秋海棠、雞冠花、萬(wàn)壽菊、長(zhǎng)春花，觀葉植物蟆葉秋海棠、網(wǎng)紋草、花葉芋、天鵝絨竹芋，木本植物三角花、比利時(shí)杜鵑、月季、八仙花等，在生產(chǎn)實(shí)踐中，均已取得較好的經(jīng)濟(jì)效益。原球莖培養(yǎng)在大花蕙蘭、蝴蝶蘭、美麗兜蘭、石斛、春蘭等蘭科植物和腎蕨、鳳尾蕨、鹿角蕨等觀賞蕨的規(guī)模性生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。胚狀體培養(yǎng)，據(jù)報(bào)道目前已在30個(gè)科150種植物上觀察到它們的愈傷組織可以分化出胚狀體，而盆栽花卉中的花葉芋、山茶花都是成功的范例。器官分化主要是從外植體直接產(chǎn)生不定芽或不定根，一般不通過(guò)從愈傷組織進(jìn)行器官分化形成植株，因?yàn)槠湫誀钣锌赡馨l(fā)生變化或經(jīng)過(guò)多次繼代培養(yǎng)后，會(huì)喪失再生植株的能力。

    2．花卉育種當(dāng)今盆栽花卉育種中，也廣泛應(yīng)用組培技術(shù)。

    胚培養(yǎng)：在花卉種間雜交或遠(yuǎn)緣雜交中，有時(shí)雖然能正常受精，但胚往往發(fā)育不完全或胚與胚乳間不親和，不能得到種子，可采用胚的早期離體培養(yǎng)促使胚正常發(fā)育，培養(yǎng)出雜交后代。如山茶花、百合和鳶尾雜交中均采用幼胚培養(yǎng)，成功地收到了雜交種子。同時(shí)，在雜交中受精困難，也可把未受精的胚珠分離出來(lái)，在試管內(nèi)用花粉受精來(lái)解決，這在草本花卉花菱草中已取得成功。

    單倍體育種：利用花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)花粉形成單倍體，在試管培養(yǎng)中通過(guò)秋水仙素處理，使染色體加倍，而成為純合二倍體植物，從而縮短新品種育種的時(shí)間，還有利于突變中隱性突變的分離。這在花卉的株型、花色、花型的大小或重瓣，葉型、葉色等產(chǎn)生變異，往往有直接利用價(jià)值。這在矮牽牛的育種中已應(yīng)用。

    體細(xì)胞雜交和植物基因工程：利用原生質(zhì)體遺傳操作技術(shù)，可以從原來(lái)不大可能進(jìn)行雜交的不同屬植物間獲得體細(xì)胞雜種或核質(zhì)雜種�？梢酝ㄟ^(guò)攝取外源目的基因，定向改造植物的某些重要性狀。

    3．植株脫病毒用無(wú)性繁殖方法來(lái)繁衍的花卉種類如菊花、香石竹、郁金香、百合、白鶴芋等，不能通過(guò)種子途徑去除病毒，用化學(xué)方法防治和高溫處理往往成效不穩(wěn)定。作為組織培養(yǎng)的無(wú)性繁殖材料，最好是去病毒組織，否則易導(dǎo)致病毒積累，危害加重。而植物的莖尖部分無(wú)維管束，病毒難以侵入。所以，莖尖培養(yǎng)是獲得無(wú)病毒植株的最好途徑。至今，莖尖培養(yǎng)脫毒法已在菊花、百合、香石竹、郁金香等盆栽花卉上推廣使用。

    4．種質(zhì)保存用無(wú)性繁殖的植物，因沒(méi)有種子，只能在植物園內(nèi)長(zhǎng)期栽培保存，耗費(fèi)大量的土地和勞力。種質(zhì)材料還易受自然環(huán)境的變化和病蟲(chóng)危害而流失。若用組織培養(yǎng)方法，保存愈傷組織、胚狀體、莖尖等組織，可節(jié)省大量人力和物力。

    （二）組織培養(yǎng)的幾個(gè)步驟

    1．材料的選用一般用于組織培養(yǎng)的材料稱為外植體。常分為兩類。一類是帶芽的外植體，如莖尖、側(cè)芽、鱗芽、原球莖等，組織培養(yǎng)過(guò)程中可直接誘導(dǎo)叢生芽的產(chǎn)生。其獲得再生植株的成功率較高，變異性也較小，易保持材料的優(yōu)良性狀。另一類主要是根、莖、葉等營(yíng)養(yǎng)器官和花藥、花瓣、花軸、花萼、胚珠、果實(shí)等生殖器官。這一類外植體需要一個(gè)脫分化過(guò)程，經(jīng)過(guò)愈傷組織階段，再分化出芽或產(chǎn)生胚狀體，然后形成再生植株。

    外植體的取用與組織部位、植株年齡、取材季節(jié)以及植株的生理狀態(tài)、質(zhì)量，都對(duì)培養(yǎng)時(shí)器官的分化有一定影響。一般階段發(fā)育年幼的實(shí)生苗比發(fā)育年齡老的栽培品種容易分化，頂芽比腋芽容易分化，萌動(dòng)的芽比休眠芽容易分化。在組織培養(yǎng)中，最常用的外植體是莖尖，通常切塊在0．5厘米左右，太小產(chǎn)生愈傷組織的能力差，太大則在培養(yǎng)瓶中占據(jù)空間太多。培養(yǎng)脫毒種苗，常用莖尖分生組織部，長(zhǎng)度為0．1毫米以下。

    2．外植體的消毒植物組培能否取得成功的重要因素之一，就是保證培養(yǎng)物在無(wú)菌條件下安全生長(zhǎng)。為此，必須抓好外植體的消毒和實(shí)行無(wú)菌操作。

    由于培養(yǎng)的植物材料大都采集于田間栽培植株，材料上常附有各種微生物，一旦被帶入培養(yǎng)基，即會(huì)迅速繁殖滋長(zhǎng)，造成污染，培養(yǎng)失敗。所以培養(yǎng)前必須對(duì)外植體進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理，消毒的尺度為既能全都?xì)�滅外植體上附帶的微生物，但又不傷害材料的生活力。因此，必須正確選擇消毒劑和使用的濃度、處理時(shí)間及程序。目前，常用的消毒劑有次氯酸鈣、氯化汞、次氯酸鈉、雙氧水、酒精（70％）等。具體消毒方法如下：

    （1）莖尖、莖、葉片的消毒消毒前先用清水漂洗干凈或用軟毛刷將塵埃刷除，茸毛較多的用皂液洗滌，然后再用清水洗去皂液，洗后用吸水紙吸干表面水分，用70％酒精浸數(shù)秒鐘，取出后及時(shí)用10％次氯酸鈣飽和上清液浸泡10～20分鐘�；蛴�2％～10％次氯酸鈉溶液浸泡6～15分鐘。消毒后用無(wú)菌水沖洗3次，用無(wú)菌紗布或無(wú)菌紙吸干接種。

    （2）根、塊莖、鱗莖的消毒這類材料大都生長(zhǎng)在土中，常帶有泥土，挖取時(shí)易遭損傷。消毒前必須先用凈水清洗干凈，在凹凸不平處以及鱗片縫隙處，均用毛筆或軟刷將污物清除干凈，用吸水紙吸干后，在70％酒精中浸一下，然后用6％～10％次氯酸鈉溶液浸5～15分鐘，或用0．1％～0．2％氯化汞消毒5～10分鐘，最后用無(wú)菌水清洗3～4次，用無(wú)菌紗布或無(wú)菌紙吸干后接種。

    （3）果實(shí)、種子的消毒這類材料有的表皮上具有茸毛或蠟質(zhì)，消毒前先用70％酒精浸泡幾秒鐘或2～10分鐘，然后用飽和漂白粉上清液消毒10～30分鐘或2％次氯酸鈉溶液浸10～20分鐘，消毒后去除果皮，取出內(nèi)部組織或種子接種。直接用種子或果實(shí)消毒，經(jīng)消毒后的材料均須用無(wú)菌水多次沖洗后接種。

    （4）花藥、花粉的消毒植物的花藥外面常被花瓣、花萼包裹著，一般處于無(wú)菌狀態(tài)，只需采用表面消毒即可接種。通常先用70％酒精棉球擦拭花蕾或葉鞘，然后將花蕾剝出，在飽和漂白粉上清液中浸泡10～15分鐘，用無(wú)菌水沖洗2～3次，吸干后即可接種。

    3．組織培養(yǎng)的條件接種后的培養(yǎng)容器置放培養(yǎng)室，室溫應(yīng)控制在23～26℃，每天12～16小時(shí)光照，光照度為1000～3000勒克斯。

    4．外植體的增殖接種后的外植體要分化出叢狀芽、愈傷組織或胚狀體，必須對(duì)培養(yǎng)基及激素的種類和濃度進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)和篩選。常用的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，激素的種類和濃度對(duì)外植體的分化和增殖起到重要的作用。也就是說(shuō)不同的花卉種類對(duì)激素的種類和濃度是有差別的（表4－－3）。

    5．誘導(dǎo)生根繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒(méi)有根，要促使試管苗生根，必須轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)基一般應(yīng)用1／2MS培養(yǎng)基，因?yàn)榻档蜔o(wú)機(jī)鹽濃度有利于根的分化。同時(shí)，不同盆栽花卉誘導(dǎo)生根時(shí)所需要的生長(zhǎng)素的種類和濃度是不同的（表4－4）。一般常用吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）和吲哚丁酸（IBA）三種。一般在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)1個(gè)月左右即可獲得健壯根系。

    6．組培苗的移栽生根或形成根原基的試管苗從無(wú)菌，溫、光、濕度穩(wěn)定環(huán)境中進(jìn)入到自然環(huán)境中，從異養(yǎng)過(guò)渡到自養(yǎng)過(guò)程，必須經(jīng)過(guò)一個(gè)煉苗過(guò)程。首先打開(kāi)試管瓶塞放陽(yáng)光充足處讓其鍛煉1～2天，然后取出幼苗用溫水將瓊脂沖洗掉，移栽到泥炭、珍珠巖、蛭石、礱糠灰等組成的基質(zhì)中，基質(zhì)使用前需高溫消毒，移栽后要適當(dāng)遮蔭，可用塑料薄膜覆蓋，保持較高空氣濕度，溫度維持在25℃左右，勿使陽(yáng)光直曬，7～10天后要注意通風(fēng)和補(bǔ)充澆水，約20～40天，新梢開(kāi)始生長(zhǎng)后，小苗可轉(zhuǎn)入正常管理。